Методы анализа некоторых противогрибковых препаратов

Гризеофульвин (

griseofulvin

)

Номенклатурное название.

7-хлор-2,4,6-триметокси-6,-метилгризен-2,-дион-3,4'

Описание.

Белый или белый с кремоватым оттенком мелкодисперсный кристаллический порошок со слабым специфическим запахом. Т. пл. 218-224°С. Удельное вращение от +355 до +366° (1%-ный раствор в диметилформамиде).

Растворимость.

Гризеофульвин практически нерастворим в воде и эфире, мало растворим в этаноле, ацетоне, бутилацетате, легко растворим в диметилформамиде.

Синтез.

Гризеофульвин - антибиотик, продуцируемый различными видами плесневых грибов, в частности Penicillium nigricans griseofutvum. При биосинтезе накапливается в мицелии и ферментативном растворе, откуда извлекается экстракцией хлороформом. Экстракт упаривают, остаток экстрагируют горячим бензолом и перекристаллизовывают из этанола.

Основой химической структуры гризеофульвина является гетероциклическая система гризан, включающая 2,3-дигидробензофуран и конденсированный с ним (в положении 2) циклогексан:

Подлинность.

Используют ИК-спектроскопию, УФ-спектрофотометрию, а также методы ТСХ и ВЭЖХ. Сравнивают ИК-спектры испытуемых веществ и стандартных образцов, снятых в дисках-с бромидом калия в области 3300-680 см-1. Они должны полностью совпадать. С теми же стандартными образцами сравнивают УФ-спектры поглощения гризеофульвина в области 230-300 нм. Его растворы в этаноле должны иметь максимумы поглощения при 231 и 291 нм.[1]

Для испытания подлинности используют цветные реакции. Раствор гризеофульвина в концентрированной серной кислоте под действием дихромата калия приобретает темно-красное окрашивание. Подлинность гризеофульвина устанавливают также по голубовато-сиреневому свечению нанесенного на фильтровальную бумагу его 1%-ного раствора в ацетоне, возникающему при облучении ртутно-кварцевой лампой. При нагревании до кипения спиртового раствора гризеофульвина с 0,2 г бисульфита натрия и 2 мл раствора гидроксида натрия появляется лимонно-желтое окрашивание. Тот же раствор после добавления концентрированной хлороводородной кислоты и порошка магния приобретает желтое окрашивание, переходящее в желто-коричневое. Окрашенное соединение извлекается амиловым спиртом.

Методом ВЭЖХ на хроматографе с УФ-детектором устанавливают наличие в гризеофульвине специфических примесей с относительными временами удерживания 0,56-0,57; 0,87-0,88 и 1,09-1,10. Подвижная фаза состоит из воды, ацетонитрила и ледяной уксусной кислоты (49:45:1). Детектируют при длине волны 291 нм. Суммарное содержание примесей не должно превышать 2%. При испытании на чистоту порошка гризеофульвина требуется микроскопический контроль с помощью окулярмикрометра, т. к. его активность повышается с увеличением степени дисперсности и достигает оптимального значения при размере кристаллов не более 4 мкм.[1]

Количественное определение.

Можно выполнить методом ВЭЖХ. При определении гризеофульвина используют подвижную фазу вода-ацетонитрил-тетрагидрофуран (60:35:5). Детектируют при длине волны 254 нм, сравнивая со стандартным раствором гризеофульвина в метаноле.

Можно определить содержание гризеофульвина спектрофотометрическим методом при длине волны 291 нм, используя в качестве растворителя безводный этанол. Известен фотоколориметрический метод, основанный на использовании цветной реакции со стабилизированной солью диазония из 4-амино-2',5'-диметоксибензанилида.[1]

Клотримазол (

clotrimazole

)

Номенклатурное название.

Дифенил-(2-хлорфенил)-имидазолилметан

Описание.

Белый или желтоватый кристаллический порошок. Т. пл. 141-145°С

Растворимость.

Практически не растворим в воде, хорошо растворим в этаноле, хлороформе и полиэтиленгликоле.[1]

Подлинность:

Снятие ИК-спектра поглощения.

Снятие УФ-спектра поглощения.

Для испытаний клоритмазола используют химические свойства, основанные на наличии в их молекулах третичного атома азота, атомов хлора.

Метод ТСХ, устанавливают значения Rf в выбранных системах растворителей и сравнивают со стандартными образцами тех же лекарственных веществ.

Количественное определение:

метод неводного титрования. Титрант 0,1 М раствор хлорной кислоты (индикатор кристаллический-фиолетовый).[1]

метод ВЭЖХ в подвижной фазе метанолозамещенный фосфат калия (3:1). Детектируют при длине волны 254 нм, в качестве внутреннего стандарта используют тестостерона пропионат.

титриметрический метод титрант - 0,004 М раствора лаурилсульфата. Титруют в присутствии хлороформа с индикатором диметиловым желтым до ярко-розового окрашивания хлороформного слоя.[1]